感受態(tài)細(xì)胞
感受態(tài)細(xì)胞（competent cell）是理化方法誘導(dǎo)細(xì)胞，即細(xì)胞處于能攝入核酸分子時的生理狀態(tài)。這種方法已經(jīng)成為基因工程的常規(guī)技術(shù)，使其處于最適攝取和容納外來DNA的生理狀態(tài)。主要原理就是通過處理使細(xì)胞的通透性變大，直觀的說，使得細(xì)胞膜表面出現(xiàn)一些孔洞，便于外源基因或載體進(jìn)入感受態(tài)細(xì)胞。由于細(xì)胞膜的流動性，這種孔洞會被細(xì)胞自身所修復(fù)。它對于我們利用體外DNA重組技術(shù)來了解真核和原核生物的基因功能特別重要。
制作方法 編輯本段
1.將快速生長的大腸桿菌置于經(jīng)低溫（0℃）預(yù)處理的低滲氯化鈣溶液中，便會造成細(xì)胞膨脹，同時Ca2+會使細(xì)胞膜磷脂雙分子層形成液晶結(jié)構(gòu)，促使細(xì)胞外膜與內(nèi)膜間隙中的部分核酸酶解離開來，離開所在區(qū)域，誘導(dǎo)細(xì)胞成為感受態(tài)細(xì)胞
細(xì)胞膜通透性發(fā)生變化，極易與外源DNA相粘附并在細(xì)胞表面形成抗脫氧核糖核酸酶的羥基－磷酸鈣復(fù)合物。
聯(lián)合其它的二價金屬離子（如Mn、Co）、DMSO或還原劑等物質(zhì)處理細(xì)菌，則可使轉(zhuǎn)化率提高100～1000倍。
2.此時，將該體系轉(zhuǎn)移到42℃下做短暫的熱刺激（90s），細(xì)胞膜的液晶結(jié)構(gòu)會發(fā)生劇烈擾動，并隨機(jī)出現(xiàn)許多間隙，外源DNA就可能被細(xì)胞吸收。進(jìn)入細(xì)胞的外源DNA分子通過復(fù)制、表達(dá)，實(shí)現(xiàn)遺傳信息的轉(zhuǎn)移，使受體細(xì)胞出現(xiàn)新的遺傳性狀。
3.將轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞在選擇性培養(yǎng)基上培養(yǎng)，篩選出帶有外源DNA分子的陽性克隆。
電擊法不需要預(yù)先誘導(dǎo)細(xì)菌的感受態(tài)，依靠短暫的電擊，促使DNA進(jìn)入細(xì)菌，轉(zhuǎn)化率最高能達(dá)到109~1010轉(zhuǎn)化子/ug閉環(huán)DNA。因操作簡便，愈來愈為人們所接受。
表達(dá)意義 編輯本段
將構(gòu)建好的載體轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)，不僅可以檢驗(yàn)重組載體是否構(gòu)建成功，最主要的是感受態(tài)細(xì)胞作為重組載體的宿主可以進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，如蛋白質(zhì)表達(dá)純化等工作。
種類劃分 編輯本段
細(xì)菌的轉(zhuǎn)化有兩種類型：一種是自然轉(zhuǎn)化（natural transformation），在自然轉(zhuǎn)化中細(xì)菌可以自由地吸收DNA，通過它來進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化；另一種是工程轉(zhuǎn)化（engineered transformation），在這種轉(zhuǎn)化中，細(xì)菌發(fā)生改變使得它們能攝入并轉(zhuǎn)化外源DNA?？莶輻U菌中的轉(zhuǎn)化屬于自然轉(zhuǎn)化，E.coli轉(zhuǎn)化就屬于工程轉(zhuǎn)化。
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